飼料中粗脂肪的測(cè)定方法
粗脂肪是飼料中的一種重要物質(zhì)。檢測(cè)飼料中的粗脂肪含量有利于科學(xué)配比飼料,合理滿足動(dòng)物的能量需求,提高飼料的利用率。本文將介紹飼料中粗脂肪的測(cè)定方法。
原理
飼料中的粗脂肪是由不同類別的脂肪組成的。在測(cè)定過(guò)程中,酶水解把飼料中的脂肪轉(zhuǎn)化為甘油和游離脂肪酸。然后通過(guò)萃取和干燥,將游離脂肪酸轉(zhuǎn)化為甲酯。最后通過(guò)氣相色譜法分析甲酯,計(jì)算出飼料中粗脂肪的含量。
儀器和試劑
(1)酶:試劑盒中含有脂肪酶。
(2)硫酸甲酯:含有少量的BHT防腐劑。
(3)鹽酸:含有0.1M的鹽酸。
(4)甲苯:用于粗脂肪的萃取。
(5)己烷:甲酯化前,用于去除甲苯。
(6)氫氣(氣體純度≥9999%):氣相色譜儀所需。
(7)超純水:用于實(shí)驗(yàn)室常規(guī)操作。
(8)蒸餾水:用于洗滌和稀釋試樣。
(9)質(zhì)量濃度為4mg/mL的C19:0內(nèi)標(biāo)溶液。
(10)試管、移液管、燒杯、濾紙等。
方法
(1)將100g粉狀飼料樣品稱取入脂肪分析容器中,加入2mL 鹽酸和2mL 水,并進(jìn)行浸泡3小時(shí)以上。
(2)通過(guò)濾紙將樣品過(guò)濾并均勻分配在酶解瓶中。加入5mL酶用于酶解樣品。
(3)加入5mL甲苯,熱攪,靜置至油水分離,取上層甲苯液,加入10mg氫氧化鈉,并去除甲苯。
(4)加入2mL硫酸甲酯,3次充分混合,并保持常溫酯化60min。
(5)加入10mL蒸餾水,并將樣品萃取3次,每次取5mL萃取液,將所有萃取液合并;并通過(guò)十分子濾膜微孔過(guò)濾。
(6)過(guò)濾后的樣品加入質(zhì)量濃度為4mg/mL的C19:0內(nèi)標(biāo)溶液,稀釋至適宜濃度,準(zhǔn)備好待測(cè)樣品溶液。
(7)在氣相色譜儀上進(jìn)行分析。
注意事項(xiàng)
(1)操作前要嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程。
(2)注意樣品中的各組分的含量水平,以選擇合適的樣品量進(jìn)行分析。
(3)保持環(huán)境清潔,防止樣品受到污染。
(4)在使用甲苯時(shí),必須進(jìn)行有機(jī)操作。
(5)在操作過(guò)程中,嚴(yán)格遵守操作階段的要求,避免樣本交叉污染。
結(jié)論
采用上述方法可以測(cè)定飼料中粗脂肪的含量。該方法簡(jiǎn)便、快捷,且準(zhǔn)確性高。在實(shí)際應(yīng)用中,可以根據(jù)需要進(jìn)行合適的方法改進(jìn)和優(yōu)化,以適應(yīng)不同精度和樣品量的需要。
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